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髓過氧化物酶(MPO)試劑盒,上海信帆*,歡迎聯(lián)系

更新時間:2017-09-28      瀏覽次數(shù):1758

髓過氧化物酶(MPO)試劑盒,上海信帆*,歡迎。

髓過氧化物酶(MPO)測試盒說明書100T/48樣)

一.試劑組成與配制:(100T/48樣)

試劑一:緩沖貯備液35ml X 1瓶,4保存6個月

         緩沖應(yīng)用液的配制:  貯備液:雙蒸水=1:9,按需要量配制,4保存1個月。

試劑二: 粉劑X2支,4保存6個月。臨用時每支加緩沖應(yīng)用液60ml溶解,可以37加熱溶解,4保存2周。

【注】若您所需測的是組織樣本,并且除髓過氧化物酶之外,還需測其他項目時,此時每支試劑二粉劑需配成濃縮一倍的溶液,即每支試劑二粉劑加到緩沖應(yīng)用液30ml中。

試劑三: 粉劑 X3支,溶劑6mlX3支,4保存6個月。用時1支粉劑倒入1支溶劑中溶解,提前一天配制,充分溶解后4保存2周。

試劑四:溶液24mlX1瓶,天冷時會凝固。用前放入37以上的水中搖晃使其溶解至透明后方可應(yīng)用,室溫保存6個月。

試劑五:粉劑X2支,4保存6個月。

試劑六:溶液0.5mlX1支,4保存6個月。

     顯色劑的配制:臨用時將試劑五粉劑1支加到100ml緩沖應(yīng)用液中,充分搖勻,待粉劑*溶解后再加入試劑六0.1ml,充分混勻,配制好的顯色劑4避光保存。

試劑七:溶液6ml X1支,4保存6個月。

 

二.組織樣本的MPO測定

(一)、樣本前處理

       1.準確稱取組織重量,以配制好的試劑二溶液為勻漿介質(zhì),按重量體積比為1:19加勻漿介質(zhì)制備成5%的組織勻漿,不需要進行離心。

【注】:若您除做髓過氧化物酶之外,還需要測其他指標(biāo)時,則組織勻漿制備要按下面方法:

1.試劑二配制時要濃縮一倍,即每支試劑二粉劑加到30ml緩沖應(yīng)用液中;

2.先用生理鹽水為勻漿介質(zhì)按實驗方法學(xué)制成濃縮一倍的勻漿,即10%勻漿(腦組織制備成20%勻漿),不要離心,取出部分濃縮一倍勻漿按1:1比例加入濃縮一倍的試劑二溶液,混勻后再進行測定。

2.取5%組織勻漿0.9ml加3號試劑0.1ml,(如果組織勻漿量不夠,可以按9:1的比例減少組織勻漿及3號試劑的用量),充分混勻后37水浴15分鐘,取出后待測。

(二)、操作表:

 

對照管

測定管

雙蒸水(ml)

3

 

樣本(ml)

0.2

0.2

試劑四(ml)

0.2

0.2

顯色劑(ml)

 

3

混勻,37水浴30分鐘

試劑七(ml)

0.05

0.05

混勻,60水浴10分鐘,取出后立即在460nm處,1cm光徑,雙蒸水調(diào)零,測各管吸光度值。

注1: 天冷時,反應(yīng)液會出現(xiàn)凝固狀態(tài),吸光度上升,您可以用25 - 37水浴箱或取一個盛25 - 37熱水的燒杯放在比色機旁邊,將各待測管一次放入水浴箱或燒杯中1 - 2 分鐘,待凝固消失后即可進行比色。

注2:混勻時,用漩渦混勻器,使液體上下充分混勻(一定要使zui下面液體也能旋轉(zhuǎn)到上面,建議不要用尖底的管子做,尤其不可用1.5ml的EP管,因為這樣非常難混勻)

髓過氧化物酶(MPO)試劑盒,上海信帆*,歡迎。

(三)、計算:

1.酶活力單位定義:每克組織濕片在37的反應(yīng)體系中,H2O2被分解1umol為1個酶活力單位。

2.計算公式:MPO活力=

3.計算舉例:

例一:取5%的小鼠心肌勻漿0.2ml按上述步驟進行檢測,測得對照管吸光度為0.030,測定管吸光度為0.164,則計算如下:

 

例二:取5%的大鼠肝勻漿0.2ml按上述步驟進行檢測,測得對照管吸光度為0.028,測定管吸光度為0.183,則計算如下:

 

例三:取10%的大鼠肝勻漿0.2ml按上述步驟進行檢測,測得對照管吸光度為0.002,測定管吸光度為0.012,則計算如下:

 

【注】*11.3為斜率的倒數(shù)

      ** 取樣中所含組織濕片的量(克)

     *** 0.05為5%的組織勻漿,即5克組織/100ml組織勻漿。

**** 0.2為取樣量0.2ml。

 

  • 血清(漿)樣本中MPO測定

(一)、血清(漿)樣本前處理:

   1、 取血清(漿)與試劑二按1:1比例稀釋,充分混勻。

  2.取上面的混合液0.9ml加3號試劑0.1ml,(如果混合液量不夠,可以按9:1的比例減少混合液及3號試劑的用量),充分混勻后37水浴15分鐘。

(二)、操作表:

 

試劑空白(可以不做)

對照管

測定管

雙蒸水(ml)

0.2

3

 

樣本(ml)

 

0.2

0.2

試劑四(ml)

0.2

0.2

0.2

顯色劑(ml)

3

 

3

混勻,37水浴30分鐘

試劑七(ml)

0.05

0.05

0.05

混勻,60水浴10分鐘,取出后立即在460nm處,1cm光徑,雙蒸水調(diào)零,測各管吸光度值。

 

注1:天冷時,反應(yīng)液會出現(xiàn)凝固狀態(tài),吸光度上升,您可以用25~37℃的水浴箱或取一根盛25~37℃熱水的燒杯放在比色機旁邊,將各代測管一次放入水浴箱或燒杯中1~2分鐘,待凝固消失后即可進行比色。

注2:混勻時,用漩渦混勻器,是液體上下充分混勻(一定要使zui下面液體也能旋轉(zhuǎn)到上面,建議不要用尖底的管子做,尤其不可用1.5ml的EP管,因為這樣非常難混勻)

(三)、計算:

1、酶活力單位定義:每升血清(漿)在37℃的反應(yīng)體系中H2O2被分解1umol為1個酶活力單位。

2、計算公式:

3、計算舉例:

        取0.45ml的血清加0.45ml的試劑二充分混勻,再加0.1ml的試劑三,再充分混勻,37℃水浴15分鐘后,取0.2ml做檢測,測得測定管OD值0.053,對照OD值0.013,則計算如下:

 

 

注:*     11.3為斜率的倒數(shù)

    **    取樣中所含血清的量(升)

    ***   0.45為血清的量

    ****  0.2為取樣量0.2ml

四、測定原理:

        中性白細胞中存在有髓過氧化物酶 ,每個細胞中所含的酶的量是一定的,約占細胞干重的5%,該酶具有使過氧化氫還原的能力,利用這一特點可以分析酶的活力,并定量測定中性白細胞的數(shù)目。其原理如下:

   

MPO+H2O2復(fù)合物;復(fù)合物+AH2(供氫體) →H2O+MPO+A產(chǎn)物

通過供氫體鄰連茴香胺供氫后生物試劑黃色化合物,在460nm處通過比色測定A產(chǎn)物的生成量,從而推算出MPO的活力以及H2O2減少的量和白細胞的數(shù)目。

髓過氧化物酶(MPO)試劑盒,上海信帆*,歡迎。

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